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PCR技術因具有很高靈敏度和強大擴增能力，極易受到微量核酸污染的影響，導致假陽性結果。因此，準確識別污染源對保障檢測結果可靠性至關重要。污染不僅影響科研數(shù)據(jù)，也可能波及臨床診斷或藥品安全檢測。
污染源類型與識別方法
PCR實驗室主要存在四大類污染源，其對應的識別方法如下：
污染源類型 | 主要來源 | 識別/監(jiān)測方法 | 關鍵差異 |
樣本間交叉污染 | 容器污染、密封不嚴溢出、移液器交叉使用、氣溶膠擴散 | 設置陰性對照；檢查操作流程（如是否更換槍頭）；空氣沉降菌檢測 | 多發(fā)生在樣本制備階段，可通過規(guī)范操作顯著降低 |
PCR試劑污染 | 試劑配制時被模板或陽性對照污染，尤其是加樣槍、容器、雙蒸水等 | 使用空白對照（無模板DNA的反應體系）；定期對試劑進行PCR檢測 | 若空白對照陽性，則提示試劑或配制過程受污染 |
擴增產物污染 | 擴增后反應管泄漏、開蓋產生氣溶膠，一個顆粒可含48,000拷貝DNA | 陰性對照出現(xiàn)目標條帶；環(huán)境表面拭子PCR檢測；加強通風與紫外消毒 | 是zui常見且zui難清除的污染源，因產物拷貝量極大 |
克隆質粒污染 | 作為陽性質控品的重組質粒意外外溢 | 在非使用質粒區(qū)域檢出目標序列；通過特異性引物區(qū)分質粒與天然序列 | 常見于頻繁使用陽性對照的檢測實驗室 |
（補充說明）部分文獻還提到操作者皮膚、頭發(fā)或實驗服可能帶來污染，但此類情況相對少見。
監(jiān)測與驗證實踐
1、設立對照：每次實驗必須包含陰性對照（無模板）和陽性對照，以監(jiān)控試劑污染與反應有效性。
2、環(huán)境監(jiān)測：定期采集臺面、離心機、移液器等表面樣本，進行PCR檢測以發(fā)現(xiàn)隱匿污染。
3、設備校準：移液器應定期校準（誤差控制在5%以內），防止因加樣不準引發(fā)異常結果。
4、記錄追蹤：詳細記錄每次監(jiān)測的時間、點位與結果，有助于追溯污染源頭。
識別PCR污染需結合實驗設計控制（如設置多種對照）與環(huán)境主動監(jiān)測。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應立即暫停實驗，排查并清潔所有可能接觸過的器材與空間。建立“污染源識別—技術鑒別—系統(tǒng)防控"三位一體的體系，可顯著降低污染發(fā)生率。
